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    • 专利摘要:
    本發明係關於一種包含去活化之腸病毒、流感病毒及/或日本腦炎的混合型多價疫苗。本發明之多價疫苗包含去活化之腸病毒抗原，及選自：(1)去活化流感病毒；(2)去活化日本腦炎病毒；或(3)去活化流感病毒混合去活化日本腦炎病毒之抗原，以及有或無一種醫藥上可接受之佐劑。本發明之多價疫苗可結合一種疫苗遞送系統或複合佐劑。本發明之多價疫苗能避免各類抗原間的干擾現象，產生良好的腸病毒、流感與日本腦炎之免疫抗體，並減少須多次注射不同抗原疫苗接種的次數。
    公开号:TW201311900A
    申请号:TW100133144
    申请日:2011-09-15
    公开日:2013-03-16
    发明作者:Ming-Hsi Huang；Pele Choi-Sing Chong；Chih-Wei Lin；Ching-Yun Chang
    申请人:Nat Health Research Institutes；
    IPC主号:Y02A50-00
    专利说明:
    新穎抗腸病毒、流感病毒及/或日本腦炎之混合型多價疫苗
    本發明係關於包含去活化腸病毒抗原之多價疫苗，更特別地係關於包含去活化之腸病毒抗原及選自：去活化流感病毒；去活化日本腦炎病毒；或去活化流感病毒混合去活化日本腦炎病毒之抗原的多價疫苗，以及該等多價疫苗之製法和用途。
    腸病毒屬於小RNA病毒科(Picornaviridae)，為一群病毒的總稱，在1997年以前，已知而被分類的腸病毒共有小兒麻痺病毒(Poliovirus)共3型(1至3型)、克沙奇病毒(Coxsackievirus)，含23種A型(A1至A22型，A24型)及6種B型(B1-B6型)、伊科病毒(Echovirus)共30型(1至33型，但8、10及28型除外)及腸病毒(Enterovirus)(68型～)等60餘型，近年來又陸續發現多種型別，依據基因序列分析結果將之重新歸類，分為人類腸病毒A、B、C、D(Human enterovirus A、B、C、D)型，其中腸病毒71型被歸類於人類腸病毒A型。
    在所有腸病毒中，除了小兒麻痺病毒之外，以腸病毒71型(Enterovirus Type 71)最容易引起神經系統的併發症，此病毒是在1969年美國加州的一次流行中首次被分離出來，當時引起很多無菌性腦膜炎與腦炎的病例。此後包括澳洲、日本、瑞典、保加利亞、匈牙利、法國、香港、馬來西亞等地都有流行的報告，台灣在十幾年前也曾經流行過，可見此型腸病毒的分布是全世界性的。
    腸病毒臨床上可以引起多種疾病，其中很多是無症狀，有些則只有發燒或類似一般感冒症狀，但有些則會出現特殊的臨床表現，如手足口病(hand-foot-mouth disease)、泡疹性咽峽炎(herpangina)、無菌性腦膜炎、病毒性腦炎、肢體麻痺症候群、急性出血性結膜炎(acute hemorrhagic conjunctivitis)、嬰兒急性心肌炎及成人心包膜炎、流行性肌肋痛、急性淋巴結性咽炎(acute lymphonodular pharyngitis)、發燒合併皮疹(febrile illness with rash)等。
    根據臨床統計數據，較常見且致死率最高的是腸病毒71型，五歲以下的幼童若感染腸病毒，會有較嚴重的併發症，大約有1000~10000分之一的致死率，由於人體免疫力的基因非常複雜，所以無法確實了解為何五歲以下的幼童有較高的致死率；另外，病例也有地區性集中的情況，所以居住環境應該也是腸病毒致病的重要因素之一。目前仍無疫苗可以預防腸病毒感染，感染後亦無特效藥，只能加強個人衛生保健。目前已經有多家公司或研究機構取得政府許可，開始進行人體臨床試驗。然而，至今仍無前案已揭示將腸病毒混合其他抗原，尤其是，將腸病毒、流感病毒、日本腦炎病毒等抗原混合製成多價疫苗的構想及具體提案。
    關於季節型流感與新型流感的預防，目前係依據每年衛生署疾管局的「流感疫苗接種計畫」實施接種。然而，根據歷年接種季節型流感疫苗的統計數據，以及2009年新型流感疫苗接種的經驗，家長會帶家中嬰幼兒施打流感疫苗的意願實在很低，因而造成流感防疫上的困難。
    現行之流感疫苗，仍以混合最有可能引發大流行的三株病毒株，並且每年更換病毒株為主。未來針對病毒變異性的問題，瑞士諾華(Novartis)藥廠、荷商葛蘭素史克(GSK)藥廠、法國賽諾菲巴斯德(Sanofi-Pasteur)等國際藥廠皆針對新型佐劑的研發作為主軸，於候選疫苗當中加入能啟動先天免疫反應的免疫佐劑，從免疫反應的源頭開始做起，進而達到對於新、舊病毒交叉保護的效果。
    至於日本腦炎疫苗之接種，在實施上必須受到的限制非常多，例如，必須與含有佐劑的疫苗間隔一個月以上接種，以免發生過敏性「接種後腦炎」；此外臺灣每年集中於3月至5月接種，許多小寶寶因此而延誤了預防注射；而且施打的次數亦最多(兒童接種時程達四次之多：開始間隔兩週接種兩劑疫苗，一年以後追加一劑，國小一年級再追加一劑)。究其原因在於，現行疫苗係源自鼠腦組織萃取病毒，精製後以甲醛不活化處理而製得，且其純化過程需使用硫酸魚精蛋白(Protamine sulfate)，故殘餘的少量不純物若與佐劑作用，就會不當強化其過敏反應。
    再者，經由感染鼠腦所製得之日本腦炎抗原，受限於無法單獨與其他抗原組合，而因此尚無法用於製備多價疫苗。然而，本發明所採用的疫苗技術為，藉由細胞培養來產製日本腦炎病毒抗原，經福馬林不活化之後，再使用benzonase核酸酶純化，如此可有效使所產生的副作用減小，並能克服日本腦炎病毒抗原與其他抗原疫苗一起接種的問題。
    於是，本發明之一方面係關於一種多價疫苗，其主要組成包含去活化之腸病毒抗原及至少一種選自：(1)去活化流感病毒；(2)去活化日本腦炎病毒；或(3)去活化流感病毒混合去活化日本腦炎病毒之抗原，及醫藥上可接受之載劑。
    於本發明之具體實施例，用於本發明多價疫苗之去活化之日本腦炎病毒，為藉由細胞培養方式獲得者。
    於本發明之具體實施例中，本發明之多價疫苗進一步包含醫藥上可接受之佐劑。於一項具體實施例，該佐劑為一種疫苗遞送系統。於另一項具體實施例，該疫苗遞送系統為鋁鹽或乳狀液。
    於一項具體實施例，該佐劑為一種複合佐劑，其包含如前所述之疫苗遞送系統及免疫刺激物質。於另一項具體實施例，該免疫刺激物質為能增強病毒中和效果的CpG寡去氧核苷酸。於又一項具體實施例，該免疫刺激物質為能增強T細胞反應的短鏈抗菌胜肽。於再一項具體實施例，該短鏈抗菌胜肽為具有左旋右旋交叉胺基酸序列之抗菌胜肽。於再另一項具體實施例，該短鏈抗菌胜肽為具有脂質化片段之抗菌胜肽。
    在本發明所使用的特殊術語有其原本的意義，如下所用的某些特殊術語是提供熟悉該技藝者能更進一步了解本發明內容。除非另有規定，本發明所涉及的科學和技術所用詞彙和一般普通技能所使用的詞彙為相同的，若是有所衝突的情況下，本發明將會給予名詞新的定義。
    於本文，使用的“多價(multivalent)疫苗”意指包含同一種細菌或病毒的不同亞型或血清型，或是混合其他來自不同細菌或病毒株抗原的疫苗，以期在一次施打或口服時，能同時預防多種疾病或能防治不同細菌或病毒株。例如，藉由注射式白喉、破傷風、非細胞性百日咳、不活化小兒麻痺、b型嗜血桿菌五合一疫苗，預防上述該等傳染病。
    “佐劑(adjuvant)”是疫苗內的一種成分，它可以加強疫苗內抗原所引發的免疫反應，達到比較好的效果。利用佐劑的添加，可以降低疫苗內抗原的需要量，例如，在新型H1N1流感疫苗的製造上，可以幫助將固定的抗原量製造成較多的疫苗劑數，在短時間內製造出大量的疫苗，及時提供所需。
    常用的佐劑大致可區分成四類：(一)無機佐劑，利用氫氧化鋁或明礬等與抗原混合製成；(二)有機佐劑，多半利用微生物及其產物如百日咳桿菌、細菌細胞壁的萃取物等；(三)合成佐劑，採人工方式合成得，例如雙股多核苷酸鏈、異丙肌苷等；及(四)油劑，此類多半成油狀，如礦物油、花生油等。
    其中，鋁鹽已廣泛被認為是一種方便使用且安全的佐劑。但是，由於其佐劑功效、異源性及再現性不理想，而在使用上受到限制。之後研發出三種具有潛力的水包油類佐劑：MF59(Tween80/Span85-stabilized squalene emulsion,Focetria,Novartis)、AS03(Tween80-stabilized squalene/α-tocopherol emulsion,Pandemrix,GSK)與AF03(polyoxyethylene cetostearyl ether/Span85-stabilized squalene/mannitol emulsion,Humenza,Sanofi-Pasteur)。乳液具有較鋁鹽更佳的佐劑功效，WHO建議使用水包油類佐劑做為減低抗原使用之工具。
    具有CpG基序(motif)的寡去氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)可以刺激動物，包括牛、豬、羊等大型家畜動物，之淋巴細胞及抗原呈現細胞的活性，增加樹狀細胞(DC)的抗原呈現活化及成熟作用，促進免疫系統對特定抗原趨向Th1細胞反應。而本發明則另意外發現，於有或無佐劑的存在下，加入日本腦炎疫苗之後，能更加增強流感與腸病毒的抗原免疫效價，顯示去活化本腦炎抗原具有類似佐劑的效用。 實施例
    本發明之其他特色及優點將於下列實施範例中被進一步舉例與說明，而該實施範例僅作為輔助說明，並非用於限制本發明之範圍。 實施例一：多價疫苗之製備 疫苗抗原組成
    本實例所使用之病毒粒子皆係以細胞培養方式獲得，疫苗組成物則是經福馬林去活化之全病毒疫苗。各抗原之來源及及製備如下：(1)去活化之H5N1亞型流感病毒疫苗(NIBRG-14)，係衍生自重組(reassorted) H5N1疫苗株A/越南/1194/2004，並於無血清培養基中藉由微載體(microcarrier)細胞培養技術，於Madine-Darby犬腎(MDCK)細胞中進行增殖；(2)去活化之H1N1亞型流感病毒疫苗(NIBRG-121)，係衍生自重組(reassorted) H1N1疫苗株A/加利福尼亞/7/2009，並於無血清培養基中藉由轉瓶(roller bottle)細胞培養技術，於Madine-Darby犬腎(NDCK)細胞中進行增殖；(3)去活化腸病毒EV71疫苗(EV71vac)係衍生自71型腸病毒株E59，並於培養基中藉由無血清灌流生物反應器(perfusion bioreactor)細胞培養技術，於Vero細胞中進行增殖；(4)去活化日本腦炎病毒疫苗(JEV)係衍生自日本腦炎病毒株Kitasato Beijing-1，並於無血清培養基中藉由轉瓶(roller bottle)細胞培養技術，於Vero細胞中進行增殖。 佐劑製備
    小鼠CpG去甲基化寡去氧核苷酸【5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3',SEQ ID NO. 1】係由Invitrogen Taiwan Ltd合成得，且以每劑量含10 μg溶於候選疫苗當中。鋁鹽(磷酸鋁)懸浮液係由台灣CDC提供，且以每劑量含300 μg溶於酸性緩衝溶液(pH=6)中。PELC乳狀液為一種經由Span85(山梨醇酐三油酸酯,Sigma-Aldrich,Steinheim,德國)，以及生物可吸收式高分子PEG-b-PLACL所乳化而成的複合相奈米乳液。其中，PEG-b-PLACL之整體分子量為7,000道耳吞，其親水端部份(75 wt-%)為水溶性聚乙二醇(PEG)；疏水端部份(25 wt-%)為具有生物可分解性質的聚乳酸與聚己內酯之共聚物(PLACL)。
    PELC乳狀液的製備，使用均質機(PT3100 polytron;Kinematica AG,瑞士)以每分鐘6,000轉之轉速，將含有PEG-b-PLACL高分子之水溶液(120毫克高分子樣品溶於0.8毫升PBS緩衝溶液)與油劑(0.165毫升Span85溶於0.935毫升角鲨烯)均質乳化5分鐘。PELC乳狀液所配製之疫苗，係取200 μL儲備乳狀液再分散於1800 μL PBS緩衝溶液中，並於注射前以試管旋轉器(Labinco LD-79,紐西蘭)於5 rpm進行混合至少1小時。再將去活化之病毒及/或CpG分別加入該緩衝溶液當中。 實施例二：疫苗接種及免疫效價分析
    五週齡雌性BALB/c小鼠購自國家實驗研究院實驗動物中心(台北，台灣)，並於使用前先於國家衛生研究院(NHRI)動物房適應至少一週。進行疫苗接種時，係將候選的組合疫苗(多價疫苗，有或無添加佐劑)以一次劑量或二次劑量時程，經肌肉內注射投藥予實驗小鼠。藉由頜下動脈採血，從經免疫小鼠收集血清樣本，並以酵素聯結免疫吸附分析(ELISA)、血球凝集抑制分析(HI)及病毒中和分析(VN)測定抗體效價。統計學之顯著差異(p<0.05)係藉由使用Microsoft Excel，數值經對數轉換再進行雙尾Student's t-試驗而測得。以下敘述各例舉性疫苗組合之免疫效價分析結果。 H5N1與H1N1組合疫苗
    於本實驗首先測試各別施打單價流感疫苗(H5N1或H1N1)是否會產生交叉中和抗體(cross-neutralizing antibodies)，或者有必要施打去活化組合疫苗，始能產生對抗該二不同亞型流感病毒之中和抗體。於圖1顯示，接受兩次H5N1去活化病毒疫苗劑量之小鼠，無法產生對抗H1N1之交叉中和抗體。同樣，接打H1N1病毒之小鼠無法產生對抗H5N1之交叉中和抗體。而，混合與去活化病毒製成之疫苗組合物，不論使用鋁鹽或乳狀液做為佐劑，皆能產生對抗此兩種去活化流感病毒所誘導之病毒中和抗體。此外，本實驗之結果亦顯示，添加PELC乳狀液之多價疫苗組合物，隨著抗原組成劑量之增加，將不會影響各別去活化流感病毒所能誘發的免疫效果(p～1)。 H5N1與EV71組合疫苗
    於本實驗，係將去活化H5N1病毒與去活化EV71腸病毒疫苗組合製成多價疫苗，並研究所得組合疫苗之免疫生成性，結果如圖2所示。單獨以去活化EV71病毒(無組合抗原)並未產生H5N1-專一性抗體免疫反應，甚至於有添加佐劑之情況亦然。而當去活化H5N1病毒併入去活化EV71病毒疫苗時，就會產生抗-H5N1專一性免疫反應。
    本實驗亦發現，PELC乳狀液能顯著增加H5N1-專一性抗體免疫反應(血液凝集抑制，HI>40)。至於EV71專一性反應，無添加佐劑之疫苗無法誘發有效的反應，而PELC乳狀液能增強-EV71專一性免疫反應。由PELC乳狀液配製得之疫苗，其所誘發之抗-EV71專一性免疫反應，在併入病毒之前與之後並無顯著差異，顯示PELC乳狀液能避免抗原競爭現象。
    本實驗亦將複合佐劑(CpG與乳狀液及CpG與鋁鹽)添加於，去活化H5N1流感病毒與去活化EV71腸病毒之組合疫苗，並於施打後觀察小鼠之抗-EV71專一性免疫反應。由圖3之結果顯示，接受添加PELC/CpG所調配得之疫苗組合物的小鼠，能一併產生良好的流感與腸病毒免疫抗體，且相較於接打添加CpG及添加鋁鹽/CpG之疫苗組合物的動物組，添加CpG與乳狀液複合佐劑，可顯著強化小鼠對於流感與腸病毒混合疫苗的免疫效果。 H5N1、EV71與JEV組合疫苗
    本實驗係將小鼠接種以去活化H5N1流感病毒、去活化EV71腸病毒與JEV去活化日本腦炎疫苗組合製成多價疫苗，並觀察其於小鼠中誘發的免疫反應。於圖4之結果顯示，在接受單一注射後第12週，本發明之疫苗組合物可使得免疫小鼠同時產生對抗H5N1、EV71及JEV之抗原專一性免疫反應。而且發現，添加佐劑後之免疫反應顯著提升(p<0.05)。
    為進一步評估添加去活化日本腦炎病毒，會對混合疫苗產生加成或是抑制效應，遂將去活化JEV添加至由H5N1與EV71所成之2合1疫苗組合中，並施打於小鼠觀察其免疫反應，結果列示於圖5。在無添加佐劑之情況，於流感與腸病毒混合疫苗中加入去活化日本腦炎病毒，可增強流感與腸病毒混合疫苗之對於腸病毒的免疫誘發效果。若使用PELC乳狀液作為佐劑，於流感與腸病毒混合疫苗中加入去活化日本腦炎病毒，可同時增強混合疫苗所誘發對於腸病毒與流感病毒的免疫效果。 組合疫苗之T-細胞免疫反應
    將BALB/c小鼠以肌肉(i.m.)注射有或無添加佐劑之候選疫苗。小鼠經免疫-追加疫苗之後，取其第7天的脾臟，進行T細胞分析。簡言說明，脾臟細胞取出後，純化出單一懸浮細胞，並用添加10%胎牛血清(FBS,HyClone,Perbio)之RPMI培養基將細胞濃度調整為1x106/mL，在96孔盤加入200 μL細胞懸浮液，在加入去活化病毒，於37℃培養4天。收集上清液，再利用細胞激素ELISA定量套組(R&D,Abingdom)，分析其細胞激素濃度。利用酵素聯結免疫吸附斑點(ELISpot)定量套組(eBioscience)，測定細胞培養第三天之細胞激素分泌情形。
    圖6顯示小鼠接種添加PELC乳狀液之去活化病毒疫苗，其誘導細胞激素分泌之效能，較無添加該佐劑之疫苗更佳；且從注射佐以PELC乳狀液之去活化病毒疫苗之免疫小鼠所純化得到的T-細胞中，製造與之細胞數顯著較受無佐劑，及佐以鋁鹽之疫苗免疫的動物組高出甚多。此外，圖6亦顯示在從經H5N1/EV71/JEV組合疫苗免疫之小鼠收集得之脾臟細胞，再將該等細胞於活體外以H5N1去活化病毒刺激後之脾臟細胞上清液中，IFN-γ分泌量較H5N1/EV71疫苗免疫組顯著增高，表示所增加的細胞反應係因為JEV之存在所致，再次證明去活化日本腦炎疫苗在增強免疫反應方面，具有類似佐劑的功效。
    根據圖7之結果更進一步顯示，小鼠若接種添加PELC與indolicidin單棕櫚酸複合佐劑(PELC/Pam-indo)、或具有左旋右旋交叉胺基酸序列抗菌胜肽indolicidin與hBD2(human β-defensin II)之H5N1去活化病毒疫苗，其脾臟細胞於相同病毒刺激之後，將會大量產生能分泌Th1細胞分泌素IFN-γ之T細胞。 其他具體態樣
    本說明書中所揭示之全部特徵可以任何組合方式組合。於是，本說明書中所揭示之各別特徵可由依相同、相等或類似目的之替代特徵取代。因此，除非另行清楚地指示，所揭示之各特徵僅為一系列同等物或類似特徵之實例。
    從前述之說明，習於該項技藝人士可容易地確定本發明之基本特徵，且在未偏離其範圍下，可進行本發明之各種改變與修飾，以使其適於各種不同用途與狀況。因此，於申請專利範圍內亦包含其他具體態樣。
    <110>　財團法人國家衛生研究院
    <120>　新穎抗腸病毒、流感病毒及/或日本腦炎之混合型多價疫苗
    <160>　1
    <170>　FastSEQ for Windows Version 4.0
    <210>　1
    <211>　20
    <212>　DNA
    <213>　人造序列
    <220>
    <223>　CpG寡去氧核苷酸
    <400>　2

    圖1顯示以去活化病毒疫苗免疫後，於小鼠中所引發的病毒中和抗體。小鼠係於第0天與第14天以候選疫苗配方進行肌肉內注射接種。在第21天採血，並以H5N1或H1N1病毒株測試血清抗體。所示數據為每組六隻小鼠所得之幾何平均值加標準偏差。無法偵測之量係定在抗體效價等於20。
    圖2顯示以去活化病毒疫苗免疫後，於小鼠中所引發的(a) H5N1-專一性HI，及(b) EV71-專一性IgG抗體。從經免疫之小鼠收集血清樣本，並藉由免疫分析測定抗體力價。所示數據為每組六隻小鼠所得之幾何平均值加標準偏差。平行虛線代表HI效價為40。*p<0.05：與不含佐劑之實驗組相較。
    圖3顯示以去活化EV71/H5N1組合疫苗免疫後，於小鼠中所引發的(a) H5N1-專一性HI，及(b) EV71-專一性VN抗體。從經免疫之小鼠收集血清樣本，並藉由免疫分析測定抗體力價。所示數據為每組八隻小鼠所得之幾何平均值加標準偏差。*p<0.05：與含CpG佐劑之實驗組相較。#p<0.05：與含CpG/alum佐劑之實驗組相較。
    圖4顯示以包含EV71去活化病毒0.2 μg、H5N1去活化病毒0.5 μg HA及JEV去活化病毒0.5 μg之候選組合疫苗免疫後，於小鼠中所引發的(a) H5N1-專一性VN，(b) EV71-專一性VN，及(c) JEV-專一性IgG抗體。從經免疫之小鼠收集血清樣本，並藉由免疫分析測定抗體力價。所示數據為每組六隻小鼠所得之幾何平均值(GMT)加標準偏差(STD)。*p<0.05：與不含佐劑之實驗組相較。
    圖5顯示以去活化EV71/H5N1組合疫苗免疫後，於小鼠中所引發的(a) EV71-專一性VN，及(b) H5N1-專一性VN抗體。從經免疫之小鼠收集血清樣本，並藉由免疫分析測定抗體力價。所示數據為每組六隻小鼠所得之幾何平均值加標準偏差。*p<0.05：與EV71+H5N1/PBS之實驗組相較。#p<0.05：與EV71+H5N1+JEV/PBS之實驗組相較。
    圖6顯示以無佐劑或添加鋁鹽(alum)、PELC或JEV之去活化EV71/H5N1組合疫苗(包含EV71去活化病毒0.2 μg與H5N1去活化病毒0.5 μg HA)免疫後，於小鼠脾臟細胞中所引發的細胞激素反應。於第12週施予追加劑量，並於七天後匯集取自每組六隻小鼠的脾臟細胞懸浮液。所示數據為三重複組所得之平均值加標準偏差。
    圖7顯示小鼠免疫追加H5N1去活化病毒疫苗之後，每組3隻小鼠取其第7天的脾臟以純化出2 x 105個T細胞，於濃度0.5μg HA/mL的去活化病毒刺激培養三天，利用ELISpot方法測定T細胞之IFN-γ分泌反應。所示數據為三重複組所得之平均值加標準偏差。
    权利要求:
    Claims (13)
    [1] 一種多價疫苗組成物，其包含去活化腸病毒之抗原及至少一種選自：(1)　去活化流感病毒；(2)　去活化日本腦炎病毒；或(3)　去活化流感病毒混合去活化日本腦炎病毒之抗原，及醫藥上可接受之載劑。
    [2] 根據申請專利範圍第1項之多價疫苗組成物，其中該去活化之腸病毒係藉由細胞培養方式獲得者。
    [3] 根據申請專利範圍第1項之多價疫苗組成物，其中該去活化之日本腦炎病毒係藉由細胞培養方式獲得者。
    [4] 根據申請專利範圍第1項之多價疫苗組成物，其中該去活化流感病毒抗原包含去活化H5N1亞型流感病毒。
    [5] 根據申請專利範圍第4項之多價疫苗組成物，其中該去活化流感病毒抗原包含去活化H5N1亞型流感病毒混合不同亞型的去活化流感病毒。
    [6] 根據申請專利範圍第1項之多價疫苗組成物，其進一步包含醫藥上可接受之佐劑。
    [7] 根據申請專利範圍第6項之多價疫苗組成物，其中該佐劑為一種疫苗遞送系統。
    [8] 根據申請專利範圍第7項之多價疫苗組成物，其中該疫苗遞送系統為鋁鹽或乳狀液。
    [9] 根據申請專利範圍第6項之多價疫苗組成物，其中該佐劑為一種複合佐劑，其包含根據申請專利範圍第7項中所述之疫苗遞送系統及免疫刺激物質。
    [10] 根據申請專利範圍第9項之多價疫苗組成物，其中該免疫刺激物質為能增強病毒中和效果的CpG寡去氧核苷酸。
    [11] 根據申請專利範圍第9項之多價疫苗組成物，其中該免疫刺激物質為能增強T細胞反應的短鏈抗菌胜肽。
    [12] 根據申請專利範圍第11項之多價疫苗組成物，其中該短鏈抗菌胜肽為具有左旋右旋交叉胺基酸序列之抗菌胜肽。
    [13] 根據申請專利範圍第11項之多價疫苗組成物，其中該短鏈抗菌胜肽為具有脂質化片段之抗菌胜肽。
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    同族专利:
    公开号 | 公开日
    TWI522469B|2016-02-21|
    CN102988977B|2015-10-28|
    CN102988977A|2013-03-27|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    CN102160892A|2011-01-12|2011-08-24|山东恒业生物技术有限公司|乙脑ev71联合疫苗|TWI531651B|2014-08-26|2016-05-01|基亞疫苗生物製劑股份有限公司|腸病毒71型新穎病毒株及其應用|
    法律状态:
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    TW100133144A|TWI522469B|2011-09-15|2011-09-15|新穎抗腸病毒、流感病毒及／或日本腦炎之混合型多價疫苗|TW100133144A| TWI522469B|2011-09-15|2011-09-15|新穎抗腸病毒、流感病毒及／或日本腦炎之混合型多價疫苗|
    CN201110338357.7A| CN102988977B|2011-09-15|2011-10-31|多价疫苗|
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